化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的內(nèi)容是什么?
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化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(CLEIA)是用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(ALP)來標(biāo)記抗體(或抗原),與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后,形成固相包被抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物,經(jīng)洗滌后,加入底物(發(fā)光劑),酶催化和分解底物發(fā)光。
(一)辣根過氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析
采用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體(或抗原),與反應(yīng)體系中的待測標(biāo)本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后,形成固相包被抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物,這時(shí)加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑使其產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。
(二)堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析
以堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記抗體(或抗原),反應(yīng)后,形成固相包被抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物,加入AMPPD發(fā)光劑,堿性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團(tuán)而發(fā)光。
化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的特點(diǎn):
①屬酶免疫測定范疇,測定過程與ELISA相似,僅最后一步酶反應(yīng)的底物改為發(fā)光劑和測定的儀器為光信號(hào)檢測儀;
②酶標(biāo)記抗原或抗體結(jié)合穩(wěn)定;
③酶催化魯米諾、AMPPD等發(fā)光劑發(fā)出的光穩(wěn)定,持續(xù)時(shí)間長,便于記錄和測定。
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