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流式細(xì)胞術(shù)的展望

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  流式細(xì)胞儀從細(xì)胞技術(shù)開始發(fā)展到今天,60年代至70年代是其飛速發(fā)展時(shí)期,激光技術(shù)、噴射技術(shù)以及計(jì)算機(jī)的應(yīng)用使流式細(xì)胞儀在原理和結(jié)構(gòu)上形成了固定的模式。

  80年代則是流式細(xì)胞儀的商品化時(shí)期,這期間不斷有新型號(hào)的儀器推出,在多參數(shù)檢測(cè)技術(shù)上不斷提高。

  進(jìn)入90年代,隨著微電子技術(shù)特別是計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,計(jì)算能力不斷提高,流式細(xì)胞儀的功能也越來越強(qiáng)大。在數(shù)據(jù)管理、數(shù)據(jù)分析方面有了長足進(jìn)步。但是,在技術(shù)原理和設(shè)計(jì)方面并沒有突破性的進(jìn)展。人們的注意力開始轉(zhuǎn)向流式細(xì)胞儀的應(yīng)用,新的熒光探針、新的熒光染料、新的染色方法不斷推出,使流式細(xì)胞技術(shù)在新的細(xì)胞參數(shù)分析方面日益發(fā)展。

  從新推出的儀器看,流式細(xì)胞儀會(huì)在硬件上不斷更新,采用更新的器件(如半導(dǎo)體激光、大規(guī)模集成電路),以實(shí)現(xiàn)小型化;用數(shù)字電路取代模擬電路,充分發(fā)揮微處理器的功能以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單化;在軟件上提高數(shù)據(jù)自動(dòng)分析能力,充分發(fā)揮圖形界面的優(yōu)點(diǎn),使操作更加簡(jiǎn)便醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

  目前,F(xiàn)CM是定量周血中HPC的參考方法,廣泛應(yīng)用于外周血干細(xì)胞移植 實(shí)驗(yàn)室,用于決定PBSC采集的時(shí)機(jī)及評(píng)價(jià)外周血采集液的收益。其基本原理為熒光免疫分析,即根據(jù)外周血與骨髓中HPC表達(dá)同樣的CD34抗原(CD34+),并利用熒光標(biāo)記CD34抗體與HPC膜表面CD34抗原結(jié)合,在特定波長的激光照射下,檢測(cè)CD34+胞發(fā)出的熒光強(qiáng)度并結(jié)合其光學(xué)特性,即較低的側(cè)向散射(SSC)和較高的前向散射(FSC),從而檢測(cè)CD34+細(xì)胞。CD34+細(xì)胞實(shí)際上包括所有的HPC,如CFU-GM,紅細(xì)胞暴發(fā)形成單位(BFU-E),巨核細(xì)胞形成單位(CFU-Mk),混合細(xì)胞集落形成單位(CFU-Mix)和原始細(xì)胞集落形成單位(CFU-Blast)。后兩種HPC明顯具有許多干細(xì)胞的特征,如它們可以自我更新,也可定向分化為一定數(shù)目的造血細(xì)胞系。體內(nèi)試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn),經(jīng)過致死劑量照射的狒狒移植足夠數(shù)量的自體CD34+細(xì)胞,可以完全恢復(fù)其造血功能,同樣的現(xiàn)象也可在經(jīng)過骨髓、摧毀性治療的病人中出現(xiàn)。有人認(rèn)為,CD34+細(xì)胞在功能上可根據(jù)是否表達(dá)CD33抗原而分為2個(gè)細(xì)胞群。早期的HPC,如CFU-Blast和LTC-IC僅表達(dá)Q CD34抗原(CD34+/CD33-),而較為成熟的定向祖細(xì)胞可同時(shí)表達(dá)CD34和CD33抗原(CD34+/CD33+)。還有人根據(jù)CD38抗原表達(dá)與否,將CD34+細(xì)胞分為CD34+/CD38-和CD34+/CD38+兩個(gè)亞型,并且認(rèn)為LTC-IC主要分布于CD34+/CD38-亞型,而更為原始的ELTC-IC則僅分布于CD34+/CD28-細(xì)胞群,說明CD34+/CD38-亞型性質(zhì)上更接近PBSC.回顧性資料表面,移植經(jīng)歷了與移植物中不同分化程度的HPC有關(guān)的兩個(gè)階段。起初,與早期造血恢復(fù)有關(guān)的是移植 物中定向祖 細(xì)胞(committed progenitor cell);繼之,持續(xù)性的移植 相由多能造血干細(xì)胞產(chǎn)生。因此,周血中不同分化程度的HPC,對(duì)指導(dǎo)干細(xì)胞采集及移植成功尤為必要。目前多參數(shù)及雙參數(shù)流式細(xì)胞低度均可通過CD34、CD33和CD38抗體等檢測(cè)標(biāo)本中不 同CD34+細(xì)胞亞型,來決定采血的時(shí)機(jī)和預(yù)測(cè)移植效果。Barnett等報(bào)道,采集液CD34+細(xì)胞數(shù)量與外周血中CD34+細(xì)胞百分率顯著相關(guān)(r=0.71),并且認(rèn)為準(zhǔn)確計(jì)數(shù)循環(huán)中CD34+細(xì)胞,可更好地預(yù)測(cè)采集液中造血干/祖 細(xì)胞含量。Weaver等觀察692例患者外周血祖細(xì)胞(PBPC)采集液中CD34+細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、集落形成單位的數(shù)量與移植動(dòng)力學(xué)關(guān)系,認(rèn)為PBPC采集液中CD34+細(xì)胞含量是預(yù)移植后中性粒細(xì)胞和血小板數(shù)量回升最有力的指標(biāo)。

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