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酶活性|酶質(zhì)量測定方法及其評價

2014-02-12 09:04 醫(yī)學教育網(wǎng)
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酶活性|酶質(zhì)量測定方法及其評價:

1.酶活性測定方法

(1)按反應時間分類法:20世紀50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性,現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用連續(xù)監(jiān)測法醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理。這種方法用自動生化分析儀上完成,可以測酶反應的初速度,其結(jié)果遠比固定時間法準確,在高濃度標本尤為明顯,但本法也受到反應時間,反應溫度,試劑等的影響,應加以注意。

1)定時法:通過測定酶反應開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法,稱為兩點法,其中t1往往取反應開始的時間。在酶反應一定時間后,往往通過加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等,使反應完全停止,所以也叫中止反應法。

2)連續(xù)監(jiān)測法:又稱為動力學法或速率法、連續(xù)反應法。在酶反應過程中,用儀器監(jiān)測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變,通過計算求出酶反應初速度。

3)平衡法:通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。

(2)按監(jiān)測方法分類法:可分為①分光光度法;②旋光法;③熒光法;④電化學方法;⑤化學反應法;⑥核素測定法;⑦量熱法。

2.酶質(zhì)量測定法

隨著免疫技術(shù)的發(fā)展,出現(xiàn)了利用酶的抗原性,通過抗原、抗體反應來直接測定酶的質(zhì)量,直接用質(zhì)量單位ng/ml、μg/L來表示酶含量的高低。免疫學方法與測定活性方法相比,其優(yōu)點是靈敏度和特異性高,不受體液中其他物質(zhì)的影響,特別是抑制劑和激活劑的影響,當血液中有酶抑制劑存在,或因基因缺陷,合成了無活性的酶蛋白時,可以測出滅活的酶蛋白量,有利于疾病診斷和科學研究。如肌酸激酶同酶MB(CKMB)質(zhì)量測定較活性測定對疾病的診斷價值高。

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