臨床咬合重建修復(fù)及深覆合、反頜等的正畸治療中常涉及咬合垂直距離（occlusal vertical dimension，OVD）的升高研究表明，咬合不對(duì)稱可引起慢性頸痛；咬合平面傾斜將導(dǎo)致下頜應(yīng)力向頸椎轉(zhuǎn)移，并產(chǎn)生補(bǔ)償性頸椎姿勢(shì)變化[5]；大鼠單側(cè)咬合升高可導(dǎo)致脊柱側(cè)彎等[6].這些研究提示頜位與咬合對(duì)整個(gè)口頜系統(tǒng)甚至全身的和諧均有著重要影響，咬合升高應(yīng)在不改變咬合模式的前提下獲得生理適應(yīng)性改建，否則可能引起口頜系統(tǒng)甚至全身的不良反應(yīng)。本試驗(yàn)擬采用兩種咬合板升高大鼠咬合垂直距離，以觀察其對(duì)大鼠咬合關(guān)系、體重增長(zhǎng)和脊柱形態(tài)的影響，為后續(xù)研究的動(dòng)物模型建立提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。40周齡雄性Wistar大鼠24只，平均體重 470 g，清潔級(jí)，按體重順序編號(hào)，隨機(jī)分為全牙列咬合板（Full Splint， Full-S）組、雙側(cè)后牙咬合板（Posterior Splint，Post-S）組和C組（對(duì)照組），每組8只。觀察時(shí)間為4周。

1.2 兩種咬合板的設(shè)計(jì)及制作

1.2.1 準(zhǔn)備工作 大鼠用5%水合氯醛（0.6 mL/100 g體重，下同）腹腔注射麻醉。用個(gè)別托盤(pán)及硅橡膠（3M ESPE ExpressTM）取上頜全牙列印模，超硬石膏（日本，MG）灌模。咬合板在模型上制作，口內(nèi)試戴調(diào)牙合，樹(shù)脂粘接（3M，ESPE，RelyXTM ARC）。

1.2.2 Full-S組 在石膏模型上制作上切牙帶環(huán)固位的鑄造金屬支架加透明塑料上頜全牙列咬合板，粘接于上頜前牙及雙側(cè)磨牙。使下頜前后牙在正中和前伸頜位均與咬合板接觸，咬合板厚度在第一磨牙區(qū)約1.5～2 mm.

1.2.3 Post-S組 在石膏模型上放置1.5 mm不銹鋼珠于上頜雙側(cè)第一磨牙區(qū)，制作帶前牙及腭部連接體的咬合基板，并在口內(nèi)堆塑樹(shù)脂（3M， ESPE，F(xiàn)iltekTM Z250），與下頜后牙均勻接觸至鋼珠高度，光照固化，調(diào)牙合，樹(shù)脂粘結(jié)，最后去除前牙及腭部連接體，完成雙側(cè)后牙咬合板。在正中頜位僅雙側(cè)后牙接觸，前伸頜位僅前牙接觸。咬合板厚度在第一磨牙區(qū)約1.5～2 mm.

1.3 一般觀察

包括咬合板存留情況、咬合關(guān)系及行為觀察，記錄每天體重并描繪體重增長(zhǎng)曲線、上下切牙咬合偏斜情況及全身姿勢(shì)變化。

1.4 脊柱X線片定點(diǎn)測(cè)量

咬合板戴入4周后，在5%水合氯醛腹腔注射麻醉下，采用有機(jī)玻璃自制大鼠X線拍片箱，拍攝全身正、側(cè)位片（日本， Shimadzu，500 mA），投照條件為45 mV， 5 mAs，球管距大鼠1 m.在正位片上，以X線片上寰椎（C1）頂點(diǎn)與第4骶椎（S4）中點(diǎn)連線作為脊柱中線，在硫酸紙上標(biāo)記第4頸椎（C4）、第1胸椎（T1）、第6胸椎（T6）、第10胸椎（T10）及第4腰椎（L4）中點(diǎn)，測(cè)量各點(diǎn)偏離中線的距離；在側(cè)位片上，標(biāo)記脊柱最大彎曲處兩胸椎上下緣切線的垂線，測(cè)量交角θ值作為胸椎最大彎曲度醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前3組間的體重差異；采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)后0～4周3組間的體重變化趨勢(shì)差異。經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)， 脊柱X線片各定點(diǎn)測(cè)量數(shù)據(jù)可采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。3組間的多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)的分析用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成，顯著性水平為0.05.

2 結(jié)果

2.1 一般觀察

觀察期間Full-S和Post-S咬合板固位良好無(wú)脫落，F(xiàn)ull-S組大鼠咬合發(fā)生不同程度偏斜，并出現(xiàn)斜頸、脊柱屈曲現(xiàn)象。而Post-S組大鼠咬合及行為未見(jiàn)明顯變化。

2.2 體重變化

實(shí)驗(yàn)前后測(cè)得各組大鼠的體質(zhì)量具體情況見(jiàn)表1.可見(jiàn)Full-S組大鼠于實(shí)驗(yàn)后體質(zhì)量明顯下降。單因素方差分析結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)前3組大鼠的體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.980，P=0.392）。重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)0～4周3組大鼠體質(zhì)量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.958，P=0.011）。LSD-t檢驗(yàn)結(jié)果表明：①Full-S組與Post-S組大鼠體質(zhì)量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.011）； ②Full-S組與對(duì)照組大鼠體質(zhì)量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003）； ③Post-S組與對(duì)照組大鼠體質(zhì)量隨時(shí)間變化的趨勢(shì)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.594）。由表1繪制的體質(zhì)量增長(zhǎng)曲線。

2.3 脊柱X線片定點(diǎn)測(cè)量

正位片：可見(jiàn)對(duì)照組大鼠脊柱各測(cè)量點(diǎn)均位于中線上；Full-S組大鼠脊柱部分測(cè)量點(diǎn)明顯偏離中線； Pos-S組大鼠脊柱各測(cè)量點(diǎn)基本位于中線上。單因素方差分析結(jié)果表明，于C4、T1、T6處脊柱偏移值3組大鼠間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05）；而T10、L4處，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。

側(cè)位片：對(duì)照組及Post-S組大鼠最大胸椎曲度α正常； Full-S組α明顯增大。單因素方差分析結(jié)果表明，3組間的胸曲角度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.790，P=0.002）。LSD-t檢驗(yàn)結(jié)果：Full-S組大鼠脊椎胸曲角度α明顯增大，與其他兩組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）；Post-S組和對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.746）。

3 討論

3.1 OVD升高動(dòng)物模型的建立

咬合垂直距離（OVD）升高是口腔臨床的常用治療手段，比如顳頜關(guān)節(jié)病的治療、Ⅱ類(lèi)和Ⅲ類(lèi)錯(cuò)牙合的矯正以及咬合重建修復(fù)等常涉及頜位的調(diào)整及咬合垂直距離的升高。患者能適應(yīng)新建的OVD是咬合重建修復(fù)成功的關(guān)鍵。采用動(dòng)物模型模擬OVD升高對(duì)了解其對(duì)口頜系統(tǒng)及全身的影響有重要的參考價(jià)值，而動(dòng)物模型的建立涉及到所選擇的動(dòng)物種類(lèi)、咬合升高材料、升高范圍、觀察時(shí)間和評(píng)價(jià)指標(biāo)等。

用于OVD升高試驗(yàn)的動(dòng)物包括豚鼠、大鼠、兔、豬、猴等。大鼠因下頜運(yùn)動(dòng)及顳下頜關(guān)節(jié)組織形態(tài)與人類(lèi)相似，實(shí)驗(yàn)成本相對(duì)較低，因此常用于咬合創(chuàng)傷[7]及咬合升高動(dòng)物模型的建立.由于臨床上咬合重建修復(fù)一般在成人進(jìn)行，且以中老年人為主，因此本實(shí)驗(yàn)選擇40周齡大鼠建模。

OVD升高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用方法有：在全牙列上粘固咬合板在雙側(cè)磨牙咬合面直接堆塑樹(shù)脂[8].嵌體式咬合升高裝置，在動(dòng)物后牙預(yù)備洞型再粘固升高裝置前牙升高，后牙被動(dòng)萌出恢復(fù)咬合接觸OVD升高裝置要求易于成形、固位好、升高距離可測(cè)、耐磨耗且不磨損對(duì)頜牙等，但目前尚無(wú)理想方法。對(duì)于OVD升高范圍，Yabushita認(rèn)為Wistar大鼠咬合垂直距離升高2.0 mm為最大張口度的30%，屬于生理性適應(yīng)范圍.

本實(shí)驗(yàn)中大鼠OVD升高距離設(shè)定為1.5～2.0 mm，在可適應(yīng)范圍內(nèi)。咬合板采用精細(xì)印模和模型技術(shù)在體外制作并在口內(nèi)調(diào)牙合、粘接，觀察期間兩種咬合板均達(dá)到良好固位與穩(wěn)定效果。其中，F(xiàn)ull-S制作過(guò)程中采用定量控制蠟型高度（在第一磨牙中央凹定點(diǎn)放置1.5 mm直徑的不銹鋼珠，充膠時(shí)去除鋼珠，完成后用卡尺測(cè)量），保證了每個(gè)大鼠咬合板雙側(cè)高度相同。而Post-S的鋼珠直接埋置在雙側(cè)第一磨牙作為高度導(dǎo)向，具有雙側(cè)對(duì)稱平衡性，X線標(biāo)記性。兩種咬合板均可在粘結(jié)前和取材后直接測(cè)得各點(diǎn)厚度，以便評(píng)估升高距離和磨耗量，這與在口內(nèi)直接粘接咬合面干擾物的方法有更好的可控性。另外，試戴調(diào)牙合及粘接過(guò)程由同一名操作者完成，可保證每只大鼠左右兩側(cè)咬合板的一致性。

3.2 不同咬合板對(duì)大鼠咬合模式的影響

大鼠的牙列式為：I1/1 M3/3，16正常情況下咬合模式為正中頜位后牙接觸時(shí)前牙與腭部粘膜接觸，前牙覆牙合、覆蓋均約為2.5～3.0 mm，而前伸頜位前牙切對(duì)切咬合時(shí)上下第一磨牙間也存在大約2.5～3.0 mm間隙。因此大鼠咬合的邊緣范圍相對(duì)人類(lèi)更大。全牙列咬合板即前后牙同時(shí)接觸的咬合板，在臨床上用于顳頜關(guān)節(jié)紊亂?。╰emporomandibular joint disorder，TMD）的治療，其中穩(wěn)定性咬合板、再定位咬合板及牙合調(diào)位咬合板均屬于此列，其治療機(jī)理在于通過(guò)OVD的升高阻斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)病變牙合位的記憶，從而緩解過(guò)大肌張力產(chǎn)生的疼痛，最終通過(guò)調(diào)牙合、咬合重建修復(fù)或正畸治療在新的頜位上建立咬合接觸關(guān)系。本試驗(yàn)中Full-S設(shè)計(jì)為OVD升高同時(shí)前后牙均勻接觸，導(dǎo)致大鼠失去正中頜位的記憶，前牙切導(dǎo)基本消除，因此出現(xiàn)不同程度的咬合偏斜；提示治療性咬合裝置如果長(zhǎng)期戴用將會(huì)引起咬合紊亂。而Post-S設(shè)計(jì)僅后牙接觸，雖然OVD升高高度與Full-S基本一致但基本保留了大鼠原有咬合模式，即后牙咬合時(shí)前牙不接觸，而前牙咬合時(shí)后牙不接觸，因此戴牙后未發(fā)現(xiàn)咬合偏斜現(xiàn)象。提示咬合裝置在不改變?cè)幸Ш夏Ｊ降那闆r下可不引起頜位異常。

3.3 咬合與全身健康的關(guān)系及其評(píng)價(jià)方法

大鼠營(yíng)養(yǎng)攝入和生長(zhǎng)是否正常直接表現(xiàn)為體重增長(zhǎng)。因此咬合裝置是否符合生理要求可通過(guò)體重增長(zhǎng)曲線來(lái)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)中戴Full-S咬合板大鼠體重明顯下降，可能由于體積較大，縮小了大鼠的固有口腔，食物不易在口腔內(nèi)混合，并且影響吞咽，導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)攝入不足而明顯影響體重增長(zhǎng)。而佩戴Post-S咬合板的大鼠體重增長(zhǎng)正常，表明大鼠可以適應(yīng)這種咬合板的咀嚼模式，并能用該咬合板正常進(jìn)食。

咀嚼系統(tǒng)神經(jīng)傳導(dǎo)及解剖結(jié)構(gòu)與脊柱具有密切關(guān)系。研究表明發(fā)育型偏頜畸形患者頸椎正位X線片顯示頦部及第4～6頸椎棘突偏離中線程度大于正常人；人為造成咬合干擾可檢查到上段頸椎及骶椎關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)異常正畸治療中長(zhǎng)期升高咬合垂直距離會(huì)導(dǎo)致頸椎位置的異常等。

人類(lèi)正常脊柱形態(tài)的維持有賴于頭部及軀干各部位的肌力平衡.而對(duì)于爬行類(lèi)動(dòng)物來(lái)說(shuō)同樣遵循這一規(guī)律。D′Attilio的測(cè)量結(jié)果發(fā)現(xiàn)大鼠單側(cè)OVD升高可導(dǎo)致胸椎T6、T10有偏移，而雙側(cè)咬合平衡后脊柱可回復(fù)正常.本實(shí)驗(yàn)中參考了D′Attilio采用X線拍片的方法評(píng)價(jià)脊柱排列的做法，并將他們?cè)O(shè)計(jì)的無(wú)底金屬拍片框改為X線透射的有機(jī)玻璃拍片箱，具有穩(wěn)定性和可重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)佩戴Full-S咬合板后大鼠也出現(xiàn)斜頸、脊柱側(cè)彎及曲背等現(xiàn)象，T10、L4明顯偏移、胸曲明顯增大，提示切導(dǎo)異常、咬合板重量等因素也會(huì)導(dǎo)致頭面部肌群負(fù)荷增加，并誘發(fā)胸椎和腰椎排列的代償性改變。而Post-S咬合板戴用后大鼠未出現(xiàn)脊柱形態(tài)的改變，表明大鼠對(duì)這種咬合板的適應(yīng)是在生理性范圍內(nèi)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，采用間接直接法完成的上頜雙側(cè)后牙咬合板用于OVD升高，未對(duì)全身發(fā)育及脊柱排列形態(tài)產(chǎn)生明顯影響，可推薦用于OVD升高大鼠模型的建立；而前后牙同時(shí)接觸的全牙列咬合板可能由于改變了大鼠咬合模式，未能達(dá)到生理性適應(yīng)，從而導(dǎo)致了體重明顯降低和脊柱形態(tài)的改變。提示咬合與全身有著密切聯(lián)系，通過(guò)觀察咬合關(guān)系、體重增長(zhǎng)曲線和脊柱的形態(tài)可以了解試驗(yàn)性咬合裝置是否為動(dòng)物所適應(yīng)，從而評(píng)價(jià)動(dòng)物模型的可用性。