家畜血吸蟲病查治技術(shù)規(guī)范
1 病原學(xué)診斷(糞便毛蚴孵化法)
1.1 材料準(zhǔn)備
1.1.1 水:pH值6.8~7.2,無水蟲和化學(xué)物質(zhì)污染(包括氯氣)的澄清水,否則需作如下處理:有氯氣的自來水應(yīng)在盛器中存放8h以上。河水、池水、井水、雨水等混有水蟲的水加溫至60℃,冷卻后再用?;蛟?萬ml水中加含30%有效氯的漂白粉0.35g,攪勻,放置20h,待氯氣逸盡;也可在放漂白粉后加入硫代硫酸鈉0.2~0.4g脫氯,0.5h后再用。對(duì)混濁的水,于每5萬ml水中加明礬3~5g,充分?jǐn)嚢?,待水澄清后用?
1.1.2 器材、試劑:竹筷、40~80目的銅篩濾杯、260目的尼龍篩兜、500ml量杯、糞桶、放大鏡、顯微鏡、吸管、載玻片、蓋玻片、取暖爐、水溫計(jì)、盆、水缸、水桶、剪刀、鬧鐘、天平、300~500ml長頸平底燒瓶或200~250ml三角燒瓶、脫脂棉。
1.1.3 送糞卡:包括村名、組名、飼養(yǎng)員或畜主姓名、畜別、畜名或畜號(hào)、性別、年齡、有無孕、采糞日期。
1.1.4 孵育室(箱)。室溫低于20℃時(shí)需有保持20~25℃的環(huán)境條件,如有溫箱或有取暖設(shè)備的房間。
1.2 操作方法
1.2.1 采糞和送檢:采糞季節(jié)宜于春秋兩季,其次是夏季,不宜于冬季。采糞的時(shí)間最好于清晨從家畜直腸中采取,或新排出的糞便。采糞量:牛、馬屬200g,豬100g,羊和犬糞(農(nóng)家)40g,每份糞樣需附上填好的送糞卡,于采糞當(dāng)天送到檢驗(yàn)室。
1.2.2 洗糞和孵化:將每頭家畜的糞便分三份,每份糞量牛、馬50g,豬20g,羊、犬10g.然后根據(jù)實(shí)際情況選用下列一種方法進(jìn)一步操作。
1.2.2.1 尼龍兜淘洗孵化法:糞便在40目銅篩和量杯中用清水淘洗,細(xì)糞渣存于500ml量杯中,待沉淀后去上清液,沉渣倒入尼龍兜用水沖淘洗,把尼龍兜中的糞渣裝入三角燒瓶或長頸平底燒瓶中加25℃左右清水,為便于觀察毛蚴,在瓶頸下二分之一處加一塊2~3cm厚的脫脂棉,再加清水至瓶口。
1.2.2.2 塑料杯頂管法:置糞于銅篩量杯中加水充分淘洗,棄去糞篩量杯中的上層水,倒去三分之二,加25℃清水,蓋上中間有孔的塑料蓋再加滿25℃清水,再將盛滿水的試管口塞一塊2~3cm厚的脫脂棉,倒插入塑料蓋孔中。
1.2.3 孵育:上述兩種方法裝好的三角燒瓶、長頸燒瓶或塑料杯放于20~25℃的箱(室)中,在一定的光照(日光或燈光)條件下進(jìn)行孵育。從孵育開始到1、3、5h后各觀察一次,尾蚴多數(shù)在水面下2mm范圍內(nèi)呈直線運(yùn)動(dòng)。發(fā)現(xiàn)血吸蟲毛蚴即判定為陽性。血吸蟲毛蚴肉眼觀察為針尖大小、灰白色、梭形、折光強(qiáng)和水中其他小蟲不同之處是在近水面作水平或斜向直線運(yùn)動(dòng),當(dāng)用肉眼觀察難與水中的其他小蟲相區(qū)別時(shí),可用滴管將毛蚴吸出,置顯微鏡下可見毛蚴前部寬,前段中間有個(gè)頂突,兩側(cè)對(duì)稱,后漸窄,周身有纖毛則可判為血吸蟲毛蚴。在一個(gè)樣品中有1~5個(gè)毛蚴為+,6~10個(gè)毛蚴為++,11~20個(gè)毛蚴為+++,21個(gè)毛蚴以上為++++。以判斷、統(tǒng)計(jì)血吸蟲病感染的強(qiáng)度。
2 家畜血吸蟲病血清學(xué)診斷(間接血凝試驗(yàn))
2.1 材料準(zhǔn)備
2.1.1 器材:V型微孔有機(jī)玻璃血凝板(孔底角90°),25μl定量移液器,滴管,可插針頭的滴管或1~2ml注射器,12號(hào)針頭。
2.1.2 生理鹽水、蒸餾水。
2.1.3 診斷液和陰、陽性血清:按說明書處理和保藏。
2.2 操作方法
2.2.1 用滴管滴4滴生理鹽水于血凝板左邊第1孔內(nèi),用同一滴管加入被檢血清1滴,使血清成5倍稀釋。
2.2.2 用帶12號(hào)針頭滴管或移液管在左邊第2、3孔中各加生理鹽水1滴(25μl)。
2.2.3 用移液器將第1孔血清混勻,混勻方法是反復(fù)吸吹三次,然后吸25μl已混勻液加入右邊鄰孔中,此孔血清成1:10稀釋。
2.2.4 用移液器和7.2.2.3一樣混勻第2孔血清,吸取25μl加入第3孔中,此時(shí)該孔血清成1:20稀釋。
2.2.5 用移液器和7.2.2.4一樣混勻第3孔血清,吸取25μl丟棄。
2.2.6 每份被檢血清和陽、陰性血清按同樣方法用3個(gè)孔,也可不用陰性血清而設(shè)生理鹽水對(duì)照孔,此時(shí)另取2個(gè)孔各加25μl生理鹽水作空白對(duì)照。
2.2.7 用帶12號(hào)針頭的滴管或移液管加入1:10、1:20血清稀釋孔及空白對(duì)照孔各1滴診斷液,使診斷液和血清混勻,置20℃~37℃條件下1~2h,等空白或陰性血清對(duì)照孔中血球全部沉于孔底中央,呈一圓形紅點(diǎn),且陽性血清兩孔中血球沒有全部沉入孔底中央即無圓形紅點(diǎn)或僅有很小的圓形紅點(diǎn)即可判定結(jié)果。
2.3 判定
2.3.1 判定標(biāo)準(zhǔn)
2.3.1.1 紅血球全部下沉到孔底中央,形成緊密紅色圓點(diǎn),周緣整齊為陰性(-)。
2.3.1.2 紅血球少量沉于孔底中央,形成一較陰性小的紅色圓點(diǎn),周圍有少量凝集紅血球?yàn)槿蹶栃裕ǎ?
2.3.1.3 紅血球約半數(shù)沉于孔底中央,形成一更小紅色圓點(diǎn),周圍有一層淡紅色凝集紅血球?yàn)殛栃裕ǎ?
2.3.1.4 紅血球均勻地分散于孔底,形成一淡紅色薄層為強(qiáng)陽性(+++)。
2.3.2 結(jié)果判定:以血清10倍和20倍稀釋孔出現(xiàn)2.3.1.2、3、4的凝集現(xiàn)象時(shí),被檢血清判為陽性。
2.3.3 如陰性或生理鹽水對(duì)照孔2h后紅細(xì)胞沉淀圖像不標(biāo)準(zhǔn),說明生理鹽水質(zhì)量不合標(biāo)準(zhǔn)或血凝板孔未洗凈,需檢查原因,重新操作。
3 家畜血吸蟲病的治療
3.1 治療對(duì)象的確定
凡用血清學(xué)或病原學(xué)方法查出的陽性畜,經(jīng)健康檢查除列為緩治或不治的病畜外,均應(yīng)進(jìn)行治療。
3.2 緩治或不治對(duì)象
3.2.1 懷孕6個(gè)月以上和哺乳期母牛以及3月齡以內(nèi)的犢牛可緩治。
3.2.2 有急性傳染病、心血管疾病或其他嚴(yán)重疾病的牛緩治或不治或建議淘汰。
3.2.3 年老體弱喪失勞力或生產(chǎn)能力的病牛建議淘汰。
3.3 稱重或估重
在有條件的情況下,盡可能稱重,以便準(zhǔn)確計(jì)算用藥量,無稱重條件時(shí)則可采用測(cè)量估重。
3.4 病畜治療記錄
最好以縣(市)為單位統(tǒng)一印制病畜治療記錄表。對(duì)已確定的治療對(duì)象,要認(rèn)真填寫治療登記表。在治療過程中要認(rèn)真作好記錄,治療結(jié)束后,要整理成冊(cè),歸檔備查。
3.5 治療的藥物和方法
3.5.1 藥物:當(dāng)前用于治療血吸蟲病病畜的首選藥物是吡喹酮,其粉劑、片劑或其他劑型一次口服治療各種家畜均可達(dá)到99.3~100%的殺蟲效果。
3.5.2 劑量:因病畜種類不同和藥物劑量不同其用藥量也不盡相同。黃牛(奶牛)30mg/㎏(限重300㎏),水牛25 mg/㎏(限重400㎏),羊20 mg/㎏,豬60 mg/㎏,馬屬動(dòng)物參照水牛或羊的劑量。
3.6 藥物反應(yīng)及處理
吡喹酮一次口服療法治療家畜血吸蟲病,一般無副反應(yīng)或輕微反應(yīng),副反應(yīng)主要表現(xiàn)為反芻減少,食欲減退,瘤胃臌氣,流涎,拉稀,心跳加快,精神沉郁,嚴(yán)重時(shí)可引起流產(chǎn),也見有出現(xiàn)牛死亡的報(bào)告。
反應(yīng)處理:一般輕微反應(yīng)不需特殊處理,少數(shù)病例特別是老弱病畜或奶??赡艹霈F(xiàn)奶產(chǎn)量下降等反應(yīng),應(yīng)加強(qiáng)觀察,采用對(duì)癥療法,即可康復(fù)。