B細胞功能檢測都有哪些方法呢?為了幫助更多考生了解,醫(yī)學教育網為大家搜集整理如下:
B細胞主要產生Ig參與機體體液免疫應答,B細胞功能低下或缺乏者對外源性抗原刺激的應答能力減弱或缺陷,特異性抗體產生減少或缺如。
(一)B細胞增殖試驗:小鼠B細胞可用細菌脂多糖(LPS)作為刺激物,人則用含SPA的金黃色葡萄球菌菌體及抗IgM抗體等刺激。
(二)溶血空斑試驗
1.原理:將SRBC免疫的小鼠脾臟(或家兔淋巴結)制成單個細胞懸液,與SRBC在瓊脂糖凝膠內混合后傾注于小平皿或玻片上。脾細胞中的抗體生成細胞釋放抗SRBC抗體,使其周圍的SRBC致敏,在補體參與下可將SRBC溶解,形成肉眼可見的溶血空斑。每一個空斑中央含一個抗體形成細胞,空斑數(shù)目即為抗體形成細胞數(shù)??瞻叽笮”硎究贵w形成細胞產生抗體的多少。
2.方法學
(1)經典溶血空斑形成試驗:用于檢測實驗動物抗體形成細胞的功能。直接法測到的細胞為IgM類抗體形成細胞;間接法在小鼠脾細胞和SRBC混合時,再加抗鼠Ig抗體,使抗體產生細胞所產生的IgG或IgA與抗Ig抗體結合成復合物,此時能活化補體導致溶血。只能檢測抗RBC抗體的產生細胞,難以檢測人類的抗體產生情況。
(2)被動溶血空斑試驗:是指抗體形成細胞產生的Ig與SRBC上的抗原結合,在補體參與下出現(xiàn)溶血反應。將吸附有已知抗原的SRBC、待檢B細胞、補體及適量瓊脂糖液混合,傾注平皿,溫育1~3小時后,形成肉眼可見的溶血空斑。該試驗可檢測SRBC上抗原相應的抗體形成細胞,因此應用范圍較廣。
3.臨床應用與評價:溶血空斑試驗主要用于測定藥物和手術等因素對體液免疫功能的影響,評價免疫治療或免疫重建后機體產生抗體的能力。
(三)酶聯(lián)免疫斑點試驗(ELISPOT)
1.原理:用抗原包被固相載體,加入待檢的抗體產生細胞,即可誘導抗體的分泌。分泌的抗體與包被抗原結合,在抗體分泌細胞周圍形成抗原抗體復合物,使細胞吸附于載體上,加入酶標記的第二抗體與細胞上的抗體結合,通過底物顯色反應的深淺,可測定出生成的抗體量,并可在鏡下計數(shù)著色的斑點形成細胞。
2.應用與方法學評價
該方法既可檢測抗體分泌細胞,又可檢測抗體分泌量。其優(yōu)點是穩(wěn)定、特異、抗原用量少;可同時檢測不同抗原誘導的不同抗體分泌,并可定量;可檢測組織切片中分泌抗體的單個細胞。
(四)體內實驗
B細胞功能減低或缺陷,可表現(xiàn)為體內Ig和血型抗體量下降或缺如。常用于體內抗體產生的特異性抗原有白喉類毒素、破傷風類毒素、多價肺炎鏈球菌菌苗等。將適量抗原皮下或肌內注射免疫,并于免疫前及免疫后1、2、3周分別采血,分離血清,測定受檢者免疫前后相應抗體的效價,判斷受檢者體內B細胞的功能。
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