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色譜法是目前分離三萜類化合物zui常用的方法,通常采用多種色譜法相組合的方法:
①吸附柱色譜法;②分配柱色譜法;③高效液相色譜法;④大孔樹脂柱色譜;⑤凝膠色譜法。
(1)吸附柱色譜法:
①常用方法,可用于分離各類三萜化合物。
②依據(jù)所用的吸附劑性質(zhì)的不同,分為正相吸附柱色譜和反相吸附柱色譜。
③正相吸附柱色譜的吸附劑常用硅膠。
④反相柱色譜通常以鍵合相硅膠Rp-18、Rp-8或Rp-2等為填充劑。
(2)分配柱色譜法:多用于分離皂苷,常用硅膠等作為支持劑,固定相為3%草酸水溶液等,流動(dòng)相為含水的混合有機(jī)溶劑:如氯仿-甲醇-水,正丁醇-水等。
(3)高效液相色譜法:是目前分離皂苷類化合物最常用的方法,分離效能較高。用于皂苷的分離制備一般采用反相色譜柱,以甲醇-水、乙腈-水等系統(tǒng)為洗脫劑。
(4)大孔樹脂柱色譜:適用于皂苷的精制和初步分離。
操作:將含有皂苷的水溶液通過大孔樹脂柱后,先用水洗滌除去糖和其他水溶性雜質(zhì),然后再用濃度由低到高的甲醇或乙醇依次進(jìn)行梯度洗脫,極性大的皂苷可被l0%——30%的醇洗脫下來,極性小的皂苷則被50%以上的醇洗脫下來。
(5)凝膠色譜法:分子篩的原理來分離分子量不同的化合物,在用不同濃度的甲醇、乙醇或水等溶劑洗脫時(shí),各成分按分子量遞減順序依次被洗脫下來。即分子量大的皂苷先被洗脫下來,分子量小的皂苷后被洗脫下來。應(yīng)用較多的是在有機(jī)相中使用的SephadexLH-20。
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