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過氧化物酶染色實驗原理

2011-04-19 20:20 來源:
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  過氧化物酶是廣泛存在于生物體中的一類酶,大部分含有血紅素,是一種結(jié)合蛋白。它可以催化H2O2或相關(guān)有機(jī)過氧化合物與有機(jī)、無機(jī)化合物的氧化反應(yīng)。血細(xì)胞所含過氧化物酶主要為髓過氧化物酶(MPO),MPO是一類糖蛋白,是人類中性粒細(xì)胞含量最多的蛋白質(zhì),約占細(xì)胞干重的3%~5%.用MPOPHMPZE探針與正常人染色體中期細(xì)胞作原位雜交,證明MPO基因定位在染色體17q11~q22,為單拷貝基因。對HL60細(xì)胞系中MPO的生物合成和加工過程研究發(fā)現(xiàn),最初產(chǎn)生的MPO是分子量為89,000的前體,有大、小亞單位各一個,對內(nèi)糖苷酶敏感,無MPO活性,MPO前體還需進(jìn)一步進(jìn)入溶酶體,經(jīng)蛋白切割后才能成熟并具有活性。這提示MPO前體轉(zhuǎn)錄時或轉(zhuǎn)錄后的加工缺陷可產(chǎn)生異常的MPO,使后者在早幼粒細(xì)胞發(fā)育過程中不能包裝到嗜苯胺藍(lán)顆粒中。醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理在臨床白血病研究中,用全長MPOcDNA作探針進(jìn)行RNA印跡法雜交,或用MPOcDNA探針作反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)或用原位雜交,證明AML表達(dá)MPOmRNA,但ALL無一表達(dá)MPOmRNA.在早期原始細(xì)胞尚無顆粒時可在核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上發(fā)現(xiàn)其陽性物,此時在光鏡下則難以識別出來,用電鏡可觀察到部分細(xì)胞顯示陽性。髓過氧化物酶是嗜天青顆粒中一種溶酶體酶,主要存在于線粒體和溶酶體中,主其能是破壞生物氧化過程中有巨毒的過氧化物,使其放出氧,參加細(xì)胞內(nèi)氧化還原過程,是一種與生物氧化有關(guān)的重要酶類。

  1985年血液學(xué)國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)推薦三種方法:二氨基聯(lián)苯胺法(DAB染色法);過氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法;二鹽酸聯(lián)苯胺法。二氨基聯(lián)苯胺染色是常用的方法,細(xì)胞顆粒中的過氧化酶,能將過氧化氫中的氧釋放出來,氧化二氨基聯(lián)苯胺(DAB),形成金黃色沉淀而定位于過氧化酶活性的部位。

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