《臨床檢驗基礎》第一章:瑞氏染色法
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【知識點名稱】瑞氏染色法
【進階攻略】瑞氏染色法是《臨床檢驗基礎》入門知識,屬于熟練掌握的內容。常在
《專業(yè)知識》和《專業(yè)實踐能力》中考查。
【知識點詳情】
瑞氏染色法:
1.瑞氏染料:由酸性染料伊紅(E)和堿性染料亞甲藍(M+)組成。伊紅通常為鈉鹽,
有色部分為陰離子。亞甲藍(又稱美藍)為四甲基硫堇染料,有對醌型和鄰醌型兩種結構。
通常為氯鹽,即氯化美藍,有色部分為陽離子。美藍容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次
級染料(即天青)。將適量伊紅、美藍溶解在甲醇中,即為瑞氏染料。甲醇的作用:一是
溶解美藍和伊紅;二是固定細胞形態(tài)。
2.染色原理既有物理的吸附作用,又有化學的親和作用。各種細胞成分化學性質不同,
對各種染料的親和力也不一樣。如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質,與酸性染料伊紅
結合,染粉紅色,稱為嗜酸性物質;細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞胞質為酸性,
與堿性染料美藍或天青結合,染紫藍色或藍色,稱為嗜堿性物質;中性顆粒呈等電狀態(tài)與
伊紅和美藍均可結合,染淡紫紅色,稱為嗜中性物質;原始紅細胞、早幼紅細胞胞質、核
仁含較多酸性物質,染成較濃厚的藍色;中幼紅細胞既含酸性物質,又含堿性物質,染成
紅藍色或灰紅色;完全成熟紅細胞,酸性物質徹底消失后,染成粉紅色。
3.pH值的影響:細胞各種成分均屬蛋白質,由于蛋白質系兩性電解質,所帶電荷隨溶
液pH而定,在偏酸性環(huán)境中正電荷增多,易與伊紅結合,紅細胞和嗜酸性粒細胞染色偏紅,
細胞核呈淡藍色或不染色;在偏堿性環(huán)境中負電荷增多,易與美藍結合,所有細胞呈灰藍
色,顆粒呈深暗,嗜酸性顆粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性顆粒偏粗,呈紫黑色。稀釋染液
必須用緩沖液,沖洗用水應近中性,否則可導致細胞染色反應呈色異常,形態(tài)難以識別,
甚至錯誤。
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